深圳高效qPCR仪报价

Quantagene q225 系列荧光定量PCR 系统主要特点：精确定量 以可靠的数据助力您的研究。采用拟合算法计算 Ct 值，定量误差不超过±10%。液体冷却循环系统确保孔间温度高度一致，温差不超过 ±0.15°C。光学系统无运动部件，稳定性增加，长期使用无需校准与维护。的仪器间重复性，不同位置、不同反应体积均不影响定量结果。快速高效 用更短的时间获得更多数据。40 个循环的常规 qPCR 只需43 分钟，较常见qPCR 仪多缩短60% 的时间。在提高速度的同时保持了96 孔的高通量，满足绝大多数实验需求。小巧轻便 节省空间及您的宝贵样品小体积为移动实验和大量部署提供可能。5-10 μl 的推荐反应体积，较常规实验节省80%的试剂用量，更节约您的珍贵样品。为了进一步确保荧光检测的就是靶DNA序列，人们又设计了只能与目的DNA序列特异结合的荧光探针如TaqMan探针。深圳高效qPCR仪报价

利用SYBR Green I可以检测PCR反应中获得的全部双链DNA,但是不能区分不同的双链DNA。为了进一步确保荧光检测的就是靶DNA序列，人们又设计了能与目的DNA序列特异结合的荧光探针，如TaqMan探针。TaqMan探针是一小段被设计成可以与靶DNA序列中间部位结合的单链DNA（一般为50-150 bp）,并且该单链DNA的5'和3'端带有短波长和长波长两个不同荧光基团。这两个荧光基团由于距离过近，在荧光共振能量转移（FRET）作用下发生荧光淬灭，因而检测不到荧光。PCR反应开始后，随着双链DNA变性产生单链DNA，TaqMan探针结合到与之配对的靶DNA序列上，并被具有外切酶活性的Taq DNA聚合酶逐个切除而降解，从而解除荧光淬灭的束缚，荧光基团在激发光下发岀荧光，所产生的荧光强度直接反映了被扩增的靶DNA总量。广东高效qPCR仪厂家Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。

qPCR和dPCR:研究人员已经通过两种方式克服了定量PCR分析的挑战：实时定量PCR(qPCR)和数字PCR(dPCR)。qPCR主要使用插入染料或荧光探针(例如TaqMan)。通过监测PCR期间的荧光强度，可以比较多个样品的DNA水平。数字PCR(dPCR)的基本工作原理很简单。先将样品分为多个PCR反应，每个反应多包含一个模板。然后通过对阳性和阴性反应进行计数来确定初始样品中模板分子的数量。尽管qPCR和dPCR都能够定量样品中的核酸，但它们有一个重要的区别。qPCR只能实现相对定量(例如，样品A的目标序列是样品B的目标序列的两倍)，除非使用此标准生成标准曲线。数字PCR本身是定量的，不需要标准曲线。另一方面，qPCR技术更加成熟和众所周知，市场上有大量商业产品可供选择。dPCR仍然是小的新鲜肉。它不如qPCR使用且价格昂贵。与dPCR相比，qPCR更适合于高通量分析，并且动态范围广。

阴性对照一般是指用水代替模板的反应孔，体系中除了模板，包括了其他的反应组分。由于qPCR的高灵敏性，阴性对照有出现扩增信号的情况，那么在针对这类问题时，我们需要判断其原因所在。使用染料法进行qPCR实验时，首先查看阴性对照的溶解曲线主峰是否跟阳性孔的主峰位置一致。如果一致，要看两者Cq相差多少，比如，针对某一种引物的实验样品Cq值为28. 5，阴性对照的Cq值为33. 6，由于Cq值相差大于5，如果按95%的扩增效率计算，两者模板量相差28倍之多，对分析数据影响不大，所以实验样品的Cq值还是可以采用的；但是，如果两者的Cq值相差 1~2，这说明阴性对照中有较大的模板污染，则需要考虑更换试剂或引物，分区加样，重新实验。如果不一致，阴性对照主峰对应的Tm值小于阳性孔的Tm值，则可能是引物性能不好，无模板或使用低浓度模板下会出现引物二聚体，这种情况则需要考虑更换引物，保证引物特异性以及扩增效率。qPCR目的PCR监测目标DNA分子扩增，PCR产物实时检测使用DNA结合染料和荧光PCR引物或探针两种方法来实现。

染料法是指在qPCR反应体系中加入一种与双链DNA分子结合的荧光染料，包括SYBR®Green I、BEBO和LC Green TMI等染料，它们可以与双链DNA（double strands DNA，dsDNA）的小沟非特异性结合，激发较强的荧光产生。经荧光定量PCR仪器检测后，对核酸进行定性和定量分析。qPCR 染料法原理:这种方法的优点是，需要一对特异性引物，操作简单、检测成本低。缺点是由于荧光染料非特异结合dsDNA产物，无法正确区分目的产物，尤其是染料结合引物二聚体易产生错误的扩增曲线，易形成误判。虽然在PCR扩增程序后添加熔解曲线分析，可以方便判断生成的荧光扩增曲线是否属于目的产物，但是对于高灵敏度要求的实验来说，染料法并不是比较好的选择。Quantagene q225 系列荧光定量PCR 系统主要特点：精确定量、快速高效、小巧轻便。广州Quantagene q225qPCR仪仪器

根据qPCR扩增曲线整体趋势，整个扩增过程主要分为四个时期，基线期、指数增长期、线性增长期和平台期。深圳高效qPCR仪报价

PCR反应需要五种关键试剂：PCR模板：也称为模板DNA，需要常规的试剂盒进行提取。如基因组DNA（gDNA），cDNA和质粒DNA。DNA聚合酶：所有PCR反应都需要可在高温下工作的DNA聚合酶。Taq聚合酶是一种常用的酶，它可以在70°C时以60个碱基/秒的速率整合核苷酸，并可以扩增高达5kb的模板，使其适用于无特殊要求的标准PCR。引物：DNA聚合酶需要短序列的核苷酸，以指示它们需要在哪里开始扩增。在PCR中，这些序列称为引物，是单链DNA的短片段（约15-30个碱基）。脱氧核苷酸三磷酸（dNTPs）：是合成DNA新链的基础，包括四个基本DNA核苷酸（dATP，dCTP，dGTP和dTTP）。PCR缓冲液：PCR缓冲液可确保在整个PCR反应过程中保持比较好条件。PCR缓冲液的主要成分包括氯化镁（MGCl2，充当DNA聚合酶的辅助因子），tris-HCl和氯化钾（在反应过程中保持稳定的pH值）。目前市面上已经有很多成熟的包含PCR缓冲液的Taq聚合酶。深圳高效qPCR仪报价

广州双螺旋科学仪器有限公司致力于精细化学品，是一家服务型的公司。公司业务分为数字PCR，纯水机，病理切片机，倍性分析仪等，目前不断进行创新和服务改进，为客户提供良好的产品和服务。公司秉持诚信为本的经营理念，在精细化学品深耕多年，以技术为先导，以自主产品为重点，发挥人才优势，打造精细化学品良好品牌。在社会各界的鼎力支持下，持续创新，不断铸造高质量服务体验，为客户成功提供坚实有力的支持。